PCR實驗室又被稱為遺傳基因擴增實驗室,特點是能把少量的DNA大幅上升,PCR是生物學研究與實驗的基本方式,廣泛用于分子生物學各行各業。比如:hlv、乙肝、禽病疫、癌基因的檢查和確診,DNA指紋、個體識別、dna鑒定及法醫物證、動植物檢疫,小動物以及衍生品檢驗,飼料原料、護膚品、食品類衛生檢測,轉基因作物與轉基因食品微生物檢驗等。
本文從PCR實驗(yan)(yan)室(shi)合理布局(ju)、工作(zuo)中區域的重要(yao)功能和(he)設備(bei)配(pei)置、實驗(yan)(yan)室(shi)的排風系統及壓力控制、裝飾裝修材料規定(ding)及其它(ta)常見問題來講(jiang)解。
一、PCR實驗室合理布局
正常情況下分成四個區域:試劑提前準備區、試品制備區、擴增區和擴增物質分析區。
PCR實驗室正常情況下為試劑提前準備區、試品制備區、擴增區和擴增物質分析區四個獨立的工作中區域并配有專用型過道,各工作中區域需設緩沖間,工作區域與緩沖間宜組裝連鎖加盟設備。不一樣的功能工作區域應該是隔開獨立,各工作區域有明顯標示,不可以直達,假如緊密結合,需組裝物件傳遞窗。
PCR實驗室區域設置并不是一成不變的,以下這些狀況必須表明:
1.假如樣版在擴增前需要破碎解決,就需要增加一個區域用以樣品破碎。
2.如果使用實時熒光PCR法,則擴增區和分析區能夠合并為一個區。
3.如果使用全自動PCR檢測儀,則樣本制備區、擴增區和分析區能夠合并為一個區。
前兩區為擴增后區,后兩區為擴增后區,擴增后區與擴增后區應嚴苛分離。實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清理材料及,需要從擴增后區流入擴增后區,也就是從試劑提前準備區、試品制備區到擴增區和擴增物質分析區,不可反向流動性。實驗室的氣旋也應從擴增后區流入擴增后區,不可反向流動性。各工作區域頂端應組裝紫外線燈,紫外線燈的光波長為254nm,每20㎡一支40W的紫外線燈。
二、實驗室各個區作用及關鍵設備
正常情況下的四大區域留意正壓力負壓力的控制。
1.試劑提前準備區:
關鍵開展試劑的制備、分開包裝和主反應混合物的制備。試劑和用以試品制作出來的原材料應立即運輸至該區域,不可通過其他區域。試劑原料務必存儲在本區內,并且在本區內制備成所需要的試劑。本區關鍵設備有天平秤、電冰箱、離心脫水機、加樣器、震蕩器等。
針對氣旋的壓力操縱,本區并沒高的要求。
2.試品制備區:
關鍵開展樣品儲存、核苷酸(RNA、DNA)獲取、存儲以及添加至擴增反應管和檢測DNA的生成。本區關鍵設備有電冰箱、超凈工作臺、離心脫水機、加樣器、震蕩器、恒溫水浴槽等。
本區的滲透壓力要求為:相較于相鄰區域為正壓力,以防止從相鄰區進到本區的大氣氣溶膠環境污染。
3.擴增區:
該區域功能的是DNA擴增和擴增精彩片段的測量。除此之外,反映混合物(來源于試劑存儲和制備區)制備成反映混合物和已制備的DNA模版(來源于樣本制備區)的加持等還可在本區中進行。針對氣旋的壓力操縱,相較于相鄰區域為負壓力,以防止大氣氣溶膠從本區漏出來。為防止大氣氣溶膠所引起的環境污染,應盡量避免在本區內不必要行走。某些實際操作亦或者樣等需在超凈工作臺中進行。
該區域的機器通常是核苷酸擴增熱力循環儀、加樣器、超凈工作臺等。在其中熱力循環儀的開關電源應專用型,并配置一個可調穩壓電源或UPS,以避免因為工作電壓的變化對擴增測量影響的關鍵開展DNA擴增。
本區的滲透壓力要求為:相較于相鄰區域為負壓力,以防止大氣氣溶膠從本區漏出來。
4.擴增物質分析區:
擴增產物的測量。本區關鍵設備有酶標儀、洗板機、加樣器和沙浴箱等。
本區的壓力差的要求為:相較于相鄰區域為負壓力,以防止擴增物質從本區蔓延至其他區域。
三、PCR實驗室排風系統及壓力控制
四大區域應產生單邊流線型、應采用全送全排。
各區域中間需具備單邊的試驗加工工藝流、貨運物流、人流量與氣旋,產生單邊步驟保護的天然屏障,防止試驗間的互相影響,避免大氣氣溶膠蔓延對實驗步驟導致環境污染。
PCR實驗室并沒嚴格凈化處理規定,可是為防止每個試驗區域交叉污染的概率,應采用全送全排的自然通風方式,嚴格把控送、排風系統比例以確保各試驗區工作壓力規定。
此外,PCR實驗室內一般有超凈工作臺、通風櫥等生產線設備,這種機器設備風量大而使用時長有間隔性,并不和空調機組使用時間一致,這就使得有這些機器設備房間在設備起停的時候特別非常容易過壓,本來正常滲透壓力一下子就破壞。這便是PCR實驗室空調機組定制的難題所屬。
四、PCR實驗室裝修設計
原材料規定:實驗室排架結構應堅固、密封性好。全部陽角線應采用弧形銜接,墻面內腔光滑、不積灰、抗腐蝕、易清潔消毒。路面應用PVC卷材或環氧樹脂膠自流坪,原材料應達到無間隙、沒有滲漏、光滑、抗腐蝕的需求。
五、PCR實驗室常見問題
試品制備區室內空間會大些:
1.好多個區域大小設定狀況,試劑提前準備區、擴增區、擴增物質分析區,室內空間能夠相對性小一些,試品制備區域置放超凈工作臺和低溫箱,室內空間應大一些。
2.試劑提前準備區、試品制備區設緊急洗眼器,以確保作業人員的安全性。
3.PCR實驗室并沒有嚴格凈化處理規定,也可以根據應用情況和資金投入挑選。